微生物菌种的筛选

2020-04-16 财经 100阅读
我认为两者都可以用构建基因文库的方法来筛选出其相关的基因。
基因文库的构建,大致可分为5个步骤:
(1)染色体DNA的片段化 从某菌株中提取其染色体DNA,将其切割成一定大小的片段,插入噬菌体载体后被包装成噬菌体颗粒。
(2)载体DNA的制备 选择适当的噬菌体载体用限制酶切开,得到左、右两臂,以便分别与染色体DNA片段的两端连接。
(3)体外连接与包装 将染色体DNA片段与载体DNA片段用T4 DNA连接酶连接。然后重组体DNA与噬菌体包装蛋白在体外进行包装。
(4)重组噬菌体感染大肠杆菌 将包装得到的重组噬菌体在大肠杆菌内经增殖并裂解宿主细胞,产生的溶菌产物组成重组噬菌体克隆库,即基因文库。
(5)基因文库的鉴定和扩增 对于文库的鉴定,可以随机挑选一定数量的克隆,用限制酶切、PCR或其他方法分析其重组体DNA来进行。
仅供参考!!!
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