1、 取载玻片用纱布擦干，载玻片的一面用marker笔画一个小圈（用来大致确定菌液滴的位置）。涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。
2、 涂片：
液体培养基：左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近5cm左右打开管盖；右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。
固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀。
3、 晾干：让涂片在空气中自然干燥。
4、 固定：让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。
5、 染色：将固定过的涂片放报纸上，滴加草酸铵结晶紫液，染1min。
6、 水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。简单染色结束可观察细胞形态。
7、 媒染：滴加1滴碘液，染1min，水洗。
8、 脱色：吸去残留水，连续滴加95%乙醇脱色20-30s至流出液无紫色，立即水洗。
9、 复染：滴加蕃红复染3-5min，水洗。至此，革兰氏染色结束。
染色结果：革兰氏阳性菌都呈紫色，革兰氏阴性菌都呈红色。
