革兰染色过程所用四种不同溶液和作用：
1、 碱性染料：这在简单染色中已讨论过,此处用结晶紫.
2、 媒染剂：其作用是增强染料与细菌的亲和力,更好地加强染料与细胞的结合.常用的媒染剂是碘液.
3、 脱色剂：帮助染料从被染色的细胞中脱色.利用细菌对染料脱色的难易程度不同,而将细菌加以区分.革兰阳性细菌不易被脱色剂脱色,而革兰阴性细菌则易被脱色.常用的脱色剂是丙酮或乙醇,这里所用的是95%的乙醇.
4、 复染液：也是一种碱性染料,目的是使脱色的细菌重新染上另一种颜色,以便与未脱色菌进行比较.这里用的是蕃红花红溶液.
革兰染色的实验步骤
1.涂片：左手持菌液试管,右手持接种环,用接种环从试管培养液中取一环菌,于载玻片中央涂成薄层（事先在背面做好标记圆圈）即可,或先滴一小滴无菌水于载玻片中央,用接种环从斜面上挑出少许,与载玻片上的水滴混合均匀,涂成一薄层.
拔或塞试管塞时,应将试管口通过火焰略加烧灼,最后将接种环在火焰上烧灼灭菌.
2.干燥：涂片后在室温下自然干燥,也可在酒精灯上略加温,使之迅速干燥,但勿靠近火焰.
3.固定：常用高温进行固定.即手持载玻片一端,标本面朝上,在灯的火焰外侧快速来回移动3~4次,共约3~4秒.要求玻片温度不超过60℃,以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜,放置待冷后染色.
固定的目的是：
① 杀死微生物,固定其细胞结构；
② 保证菌体能牢固地粘附在载玻片上,以免水洗时被水冲掉；
③ 改变菌体对染料的通透性,一般死细胞原生质容易着色.
4.染色：将固定好的涂片放于报纸上,每次滴加一滴染液进行染色.
注意：乙醇脱色时滴加乙醇至流出液为无色立即进行水洗；
蕃红复染由于时间较长,应在染液干燥前补加染液；
镜检时吸水注意不要擦标本.
革兰染色的实验现象
如果将细菌做革兰染色,凡染后菌体呈蓝紫色的,称为“革兰阳性菌”；菌体是伊红色,称“革兰阴性菌”.无论阳性菌还是阴性菌,都有杆菌和球菌.葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌是临床最为常见的病原菌,葡萄球菌属于革兰阳性菌,大肠杆菌属于革兰阴性菌中的肠杆菌科,除大肠杆菌以外,临床较常见的肠杆菌科细菌还有变形杆菌属,沙门菌属、克霉白菌属；铜绿假单胞菌是临床常见的较耐药革兰阴性杆菌.
