1、最主要的环节是酒精脱色。
2、还有其他环节：制片时菌膜的厚念伏度和细菌量是否太多、脱色时间是否适宜、稀释石炭酸复红的浓度及是否已有沉淀、加热固定时是否加热过度等。
3、革兰氏染色法原理：G+、G-细菌的细胞壁成分和结构不同。G+的CW主要有肽聚糖形成的网状结构组成，在染色过程中，当用95%乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，CW通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在CW内而不易脱色，因此呈蓝紫色。G-的CW中肽聚糖含量低，脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，CW的通透性增加，使结晶紫-碘复合物容易被乙醇仔尺携抽提出来而脱色，然后又被染上了复染剂的困饥颜色，因此呈现红色。
