原位杂交dna和rna使用的dig是一样的么

2020-07-11 文化 108阅读
核酸杂交种物标准技术,用于检测DNA或RNA特定序列(靶序列).经典核酸杂交DNA或RNA先转移并固定硝酸纤维素或尼龙膜,与其互补单链DNA或RNA探针用放射性或非放射性标记,膜杂交,探针通氢键与其互补靶序列结合,洗未结合游离探针,经放射自显影或显色反应检测特异结合探针.
经典核算杂交主要包括:DNA印迹杂交(Southern blot)RNA印迹杂交(Northern blot)及斑点杂交原位杂交:
1、 DNA印迹杂交(DNA blot hybridization)——两种核酸印迹:
DNA或RNA溶液直接点于硝酸纤维素膜或尼龙膜(斑点或狭线印迹)
经琼脂糖凝胶电泳片段DNA或RNA转移膜(SouthernNorthern印迹).DNA电泳前先用限制性内切酶消化.
2、 RNA印迹杂交(RNA blot hybridization):
RNA印迹杂交种检测已固定滤膜总RNA或mRNA特定靶序列技术.
3、 斑点杂交
少量核酸品点硝酸纤维素滤膜,80℃烘烤牢固固定膜,再用探针进行杂交.尼龙膜,特别聚偏氟乙烯(PVDF)与DNA结合力更高,坚韧、易操作.点手工,用手工点品.检测用放射性探针自显影或非放射性探针显色.用于DNA或RNA析.
4、 原位杂交
保持细胞形态条件,进行细胞内杂交,显影或显色.用于DNA或RNA析.荧光原位杂交(FISH)进行染色体DNA析用于物研究许领域及临床细胞遗传研究.其主要优点仅细胞裂期,且裂间期核诊断染色体变化.
广义核酸杂交指非同源核酸间复性(氢键结合)程.说,目前基检测技术,除质普外都或或少涉及核酸杂交原理.PCR引物复性程、基芯片杂交检测程、基测序引物复性程及各种SNP检测等等.
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