流式细胞术中荧光补偿该如何调节？
以FITC和PE为例来看光谱重叠。FITC单染管的荧光会部分漏到PE通道中，而这部分需要从PE通道中减掉溢漏过来的FITC荧光。
那么荧光补偿该如何调节呢？
l调节电压
l检测荧光通道的自发荧光
l每个荧光通道做单染管对照检测
何为单染管对照？
l细胞
l补偿微球
细胞通常是流式抗体单染管对照的样本首选，但是当细胞数量有限，无多余细胞用于抗体单染或感兴趣的表面抗原表达较低，阳性分群不明显不足以用来调节补偿时，建议选择补偿微球。
补偿调节时要注意：
l使用未染色的细胞做PMT的电压设置
l不要使用未染色的补偿微球设置电压
eBioscience提供两种补偿微球：OneCompeBeads与UltraCompeBeads。
微球大小和淋巴细胞相当，可连接各种荧光标记的抗体来调节补偿。每滴微球中都含有两群：一群是可以结合抗体的阳性群，一群是不会与抗体反应的阴性群。
优点：
l使用方便，一滴即可
l使用实验抗体与微球有效结合调节补偿，无需再用CD4分群来调节
l细胞替代物，适应各种孵育时间，结果稳定
流式细胞术中荧光补偿该如何调节？
l能与各种种属和亚型的抗体反应
Product
SpeciesCompatibility
ChainRecognition
Features
MouseIg
RatIg
HamsterIg
RabbitIg
KappaLightChain
LambdaLightChain
OneDrop
OneVial
Allcellsizes
VioletLaser
UltraCompeBeads01-2222
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OneCompeBeads01-1111
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CompetitorXAnti-MouseIg,k
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CompetitorXAnti-RatIg,k
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CompetitorXAnti-Rat/HamsterIg,k
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CompetitorXPlusAnti-MouseIg,k
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CompetitorXPlusAnti-RatIg,k
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CompetitorZAnti-MouseBeadKit
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竞争品牌的微球是分种属的，使用不同抗体要购买多个产品以使用
注：兔来源的抗体与微球结合力较弱，但某些还是可以使用
l适用于各种激发光---适用于488nm蓝光，532nm绿光，561nm黄光，633-635nm红光，UltraCompeBeads尤其适用紫外(355nm)或者紫色(405nm)激光器
l微球本身信号经过优化适合补偿调节
l价格相当，有小包装
操作步骤：
1.准备好流式管，每种荧光抗体一个；
2.将微球翻转或者涡旋混匀；
3.在每管中加入一滴微球；
4.在管中分别加入相应的1test抗体（不同抗体1test的用量不同，具体参见说明书）；
5.敲击或者涡旋混匀；
6.2-8℃暗处孵育15-30分钟；
7.每管加2ml流式染色缓冲液，400-600xg离心3-5分钟；
8.弃上清，每管加入0.2-0.4mL流式染色缓冲液；
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9.混匀后上机分析
