首先，你要准备的是单细胞悬液。来源于体液的样本，比如血液，脑脊液等等，这个好办。去除红细胞后就可以直接染色了。
而贴壁培养，或者来源于器官（比如脾脏，淋巴结），或者组织（比如肿瘤）的细胞，需要通过机械加上酶消化等方法来分离细胞。所采用的方法要根据不同样本各自优化。目的就是尽可能产生多的活细胞，同时不破坏细胞表面的蛋白，以免影响抗体的识别。
得到的细胞悬液需要过滤，一般使用40-70微米孔径的滤网，以除去团块和杂物。染色前再根据实验要求进行封闭。所使用的抗体浓度需要经过系列稀释，计算染色指数（stainindex）而得到最佳工作浓度
