确定母牛发情的方法称为发情鉴定。母牛发情时，其精神状态、行为和生殖器官等都有一定的变化。根据这些变化可以比较准确地判断牛的发情程度，适时配种，提高母牛受胎率。母牛发情鉴定的主要方法有外部观察法、阴道检查法和直肠检查法几种。
（1）外部观察法
主要观察母牛的精神、爬跨行为、阴道分泌物状况以及因爬跨在身体上留下的痕迹。发情母牛表现兴奋不安，经常哞叫；在牛舍内常站立不卧，当有人走过其后部时，常回顾；食欲减退，反刍的时间减少或停止；排粪、排尿次数增多，尾频频上翘，泌乳量下降。母牛发情开始时，在运动场或放牧时会爬跨其他母牛，但不接受其他母牛的爬跨；在发情旺盛期，则接受其他母牛的爬跨。发情牛被爬跨时站着不动，并举尾，如不是发情牛，则往往拱背逃走。其他牛常嗅发情牛的阴唇，发情母牛的背腰和尻部有被爬跨所留下的泥土、唾液。有时母牛不发情也会爬跨，因此应结合母牛的精神状况和外阴变化确定母牛是否发情。若在室外没有及时发现爬跨的母牛，进牛舍可以根据尾根毛的竖立、甚至皮肤磨破等后躯被爬过的痕迹判断。
（2）阴道检查法
发情母牛外阴部红肿，阴道黏膜充血潮红，表面光滑湿润。子宫颈外口充血、松弛、柔软开张，排出大量透明的牵缕性黏液，不易挂断。在尾上端阴门附近，可以看出黏液分泌物的结痂。发情初期的母牛子宫口的黏液清亮如水，随着发情时间的推移，逐渐变稠，量也由少变多，到发情后期，量逐渐减少且混而黏稠，有时含淡黄的细胞碎屑。不发情的母牛阴道苍白、干燥，子宫颈口紧闭。
（3）直肠检查法
检查者穿好工作服，衣袖挽起，带长臂手套。检查时，宜站在牛的正后方，五指并拢成锥形，缓慢捻转伸入肛门，进入直肠，掏出粪便后，掌心向下，按压抚摸，在骨盆腔底部，即可摸到一个长形、质地较硬的棒状物——子宫颈，再向前下方可摸到角间沟。角间沟的两旁为向前下方弯曲的两侧子宫角，沿着子宫角大弯下外侧可摸到卵巢，用手指检查其形状、大小，以及卵巢上卵泡的发育情况，判断母牛是否发情。一般情况下，发情母牛子宫颈稍大而软，子宫黏膜水肿，子宫角坚实、体积增大，子宫收缩反应比较明显。不发情的母牛，子宫颈细而硬，子宫较松弛，收缩反应差。发情母牛卵巢中的卵泡表面突出，圆而光滑，触摸时略有波动。卵泡直径发育初期约1.5厘米，发育最大时可达2.5厘米。在排卵前6～12小时，卵泡质地柔软，波动明显。排卵后，原卵泡处有不光滑的小凹陷，此后将形成黄体。
直肠检查时要注意卵泡与黄体的区别。卵泡有光滑、较硬的感觉。卵泡与卵巢连接处光滑，无界线，呈半球状突出于卵巢表面，而没有退化的黄体在卵巢上一般呈扁圆形条状突起。此外，卵泡发育是进行性的，由小到大，由硬到软，由无波动到有波动，由无弹性到有弹性。没有妊娠时，黄体则发生退行性变化，发育时较大，较软，到退化时期愈来愈小，愈来愈硬。
母牛受胎效果的好坏，能否准确掌握母牛的发情是关键。一般正常发情的母牛其外部表现比较明显，所以用外部观察辅以阴道检查就可以判断。但母牛发情持续期较短，不注意观察则容易漏配。在生产实践中，可以发动值班员、饲养员和挤奶员共同观察。建立母牛发情预报制度，根据前次发情日期，预报下次发情日期（按发情周期计算）。有些母牛常出现安静发情或假发情，有些母牛营养不良，生殖器官机能衰退，卵泡发育缓慢，排卵时间延迟或提前，对这些母牛可以通过直肠检查判断其排卵时间来确定最佳输精时间。
此外，还有一些辅助检查设备，如奶牛计步器检查和B超检查等方法，奶牛产奶量的减少也是发情的重要征兆，可以作为辅助检查的指标。
