DNA聚合酶作用部位是磷酸二酯键。
1、聚合作用：在引物RNA-OH末端，以dNTP为底物，按模板DNA上的指令，即A与T，C与G的配对原则，逐步逐个、连续地将dNTP加到延伸中的DNA分子3'-OH末端，逐步合成延长中的子链DNA。这是DNA聚合酶的主要作用；
2、3’→5’'外切酶活性（校对作用）：这种酶活性的主要功能是从3’→5’方向识别和切除不配对的DNA生长链末端的核苷酸，3’→5’外切酶活性的主要功能是校对作用。
当加入的核苷酸与模板不互补而游离时则被3’→5’外切酶切除，以便重新在这个位置上聚合对应的核苷酸，可见，3’→5’外切酶活性对DNA复制真实性的维持是十分重要的。以保证复制过程的保真性和准确性；
3、5’→3’外切酶活性（切除修复作用）：该活性是从5’→3’方向水解DNA延长链前方的DNA链（即只对DNA上双链处的磷酸二酯键有切割作用），主要产生5'—脱氧核苷酸。这种酶活性在DNA损伤的修复中可能起着重要作用。
扩展资料：
1、DNA聚合酶可以在每一个新掺入的核苷酸与模板链之间进行仔细地监测。只有在配对正确的情况下，它才会催化核苷酸之间聚合形成磷酸二酯键。
2、即使当DNA聚合酶的监测偶然失误，掺入了错误的核苷酸，它还能通过校读的功能纠正错误。
参考资料来源：百度百科-DNA聚合酶
