医学微生物学格兰染色实验报告怎么写

2020-09-19 健康养生 63阅读
革兰染色法
【步骤】:制片、染色、镜检
1、制片
涂片 :取洁净载玻片一张,用接种环取生理盐水2环,置于玻片上,接种环灭菌后,取细菌培养物少许与盐水混匀,并涂成均匀薄膜涂片。如用液体材料,如痰、尿液、脓汁等可直接涂片,不必加生理盐水。
干燥 :涂片最好在室温下自然干燥,必要时可将标本面向上,小心间断地在弱火高处烘干,但切勿紧靠火焰将涂膜烤枯。
固定:涂片干燥后,将标本片在酒精灯上快速的来回通过三次,共约2s~3s,注意温度不可太高,以涂片涂膜的反面触及皮肤觉轻微烫觉即可。
固定目的:①杀死细菌;②使菌体与玻片粘附较牢,在染色时不致被染液和水冲掉;③菌体蛋白变性易着色。
2、染色
结晶紫初染 1 min → 卢戈氏碘液媒染 1 min → 95%酒精脱色 30sec~1 min → 稀释石炭酸复红复染 1 min,油镜观察
【原理】:
①革兰阳性细菌细胞壁结构较致密,肽聚糖层厚,脂质含量少,乙醇不易渗入;革兰阴性菌细胞壁结构较疏松,肽聚糖层少,脂质含量多,乙醇易渗入。
②革兰阳性菌的等电点低,革兰阴性菌的等电点较高,在相同pH条件下,革兰阳性菌所带负电荷比革兰阴性菌多,与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固不易脱色。
③革兰阳性菌细胞内含有大量核糖核酸镁盐,可与结晶紫和碘牢固的结合成大分子复合物,不易被乙醇脱色;而革兰阴性菌细胞内含极少量的核糖核酸镁盐,吸附染料量少,形成的复合物分子也较小,故易被乙醇脱色。
【结果观察】:紫色为阳性,红色为阴性
【影响因素】
①操作因素:涂片太薄或太厚,固定时菌体过分受热,以及脱色时间长短,都会影响染色结果
②染液因素:所有染液应防止染液蒸发而改变浓度,特别是卢戈碘液久存或受光作用后易失去媒染作用;涂片积水过多会改变染液浓度,影响染色效果
【意义】:
①鉴定细菌:可将细菌分为革兰阳性菌(紫色)和革兰阴性菌(红色),
②观察致病性:大多数G+菌以外毒素为主要致病物质,而G- 菌以内毒素为主要致病物质。两者的致病机制和临床表现各不相同,
③参考选择抗菌药物:大多数G+菌对青霉素、头孢菌素等敏感;大多数G- 菌对氨基苷类抗生素如链霉素、庆大霉素等敏感。
【用途】:一般细菌学检查或鉴定
我这个比较简单概括,你最好详细化,比如染色步骤
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