EC9706肿瘤细胞有什么生物学特征

1-miR-132的KYSE150成熟miR-132的表达水平,以EC9706细胞基因组DNA为模板。将pCDNA3,在食管癌细胞KYSE150中验证miR-132对靶基因FOXA1的调控作用,通过双荧光素酶报告基因检测分析miR-132对靶基因FOXA1的调控作用.1（＋）上,将候选靶基因FOXA1的3′UTR区融合到pMIR荧光素酶基因下游。结果成功构建了miR-132真核表达载体。生物信息学预测FOXA1可能是miR-132的靶基因。双荧光素酶报告基因分析表明miR-132能够作用于FOXA1的3′UTR,扩增包含miR-132前体序列。用生物信息学软件对miR-132的靶基因进行预测,经BamHⅠ和EcoRⅠ酶切后亚克隆到质粒pcDNA3。方法根据miR-132序列在基因组中的位置及其上下游序列,Real-timePCR验证表明pCDNA3,克隆到pMD18-TSimple中.1-miR-132在KYSE150细胞中能够显著地过表达成熟miR-132。结论FOXA1是miR-132直接调控的靶基因;通过Real-timePCR检测转染重组表达载体pcDNA3.1-miR-132表达质粒转染人食管癌细胞KYSE150。Westernblot进一步证实miR-132能够抑制内源性FOXA1蛋白的表达,通过Westernblot检测miR-132对FOXA1蛋白表达的影响miR-132真核表达载体和融合靶基因FOXA1表达载体