1，首先需要根据三个目标基因及Actin的序列设计四对引物，引物设计原则同普通PCR引物，网上有很多介绍的，最好其中一个引物是结构基因部分序列+内含子部分序列这种模式。序列长一些25++，退火温度高一些（一般检测时常会60℃附近做两步法扩增），尽量选择错配情况少的引物组合。许多软件，如primerprimer5可以协助做引物设计。扩增产物150-200bp左右。有可能不是一次成功的，所以跟导师申请的时候提前说好重新合成引物的可能比较大。
2，从各部位的新鲜样品中提取RNA、检测RNA、反转录不需要说的吧？Trizol试剂是用的很频繁的RNA提取试剂，效果不错。上海生工、大连宝公司的我都用过，都不错。最好买商品化的RNase-free耗材和水。
3，引物合成完了，需要做融解曲线，判断PCR扩增是否具有很好的特异性，如果怎么做条件优化，扩增都不是特异性的，那就需要重新设计引物。怎么做融解曲线网上也有很多教程。
4，如果融解曲线比较漂亮，就可以正式检测你的样品了。
还是建议你改用taqman法做定量分析，SYBR法总不踏实，需要不少实验来证实自己的定量分析数据是特异性扩增的结果。
