悬浮细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代,或用离心法后,加入新培养基后再吹打分散进行传代
贴壁细胞实验需准备超净台喷洒酒精,紫外照射30min。准备好培养瓶/皿,离心管,10%DMEM,0.25%胰酶,D-hanks液等,带上手套,口罩等,倒去旧培养基,用D-hanks液清洗一遍,去除沉积的死细胞等。
加入2ml0.25%胰蛋白酶消化液,消化2~3min,倒置显微镜下观察,待细胞单层收缩突起出现空隙时,倒去酶液。加入1~2滴管含有血清的培养液,反复吹打细胞,使其成细胞悬液。
以1:2或1:3进行分装,补充新鲜培养基,并在培养瓶上做好标记,注明代号、日期,轻轻摇匀,37℃CO2培养箱培养。细胞培养24h后,即可观察培养液的颜色及细胞的生长情况。
扩展资料:
注意事项
1、传代培养时要注意无菌操作并防止细胞之间的交叉污染。所有操作要尽量靠近酒精灯火焰。每次最好只进行一种细胞的操作。每一种细胞使用一套器材。培养用液应严格分开。
2、每天观察细胞形态,掌握好细胞是否健康的标准:健康细胞的形态饱满,折光性好,生长致密时即可传代。
3、如发现细胞有污染迹象,应立即采取措施,一般应弃置污染的细胞,如果必须挽救,可加含有抗生素的BSS或培养基反复清洗,随后培养基中加入较大量的抗菌素,并经常更换培养基等。
参考资料: