革兰氏染色是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，革兰氏染色属复染法，即将标本固定后，先用龙胆紫染色，加碘液媒染后用酒精脱色，再用蕃红复染。
革兰氏染色最为关键的步骤就是脱色，可以说脱色决定了革兰氏染色的成败。虽说革兰氏阳性菌不容易脱色，但如果脱色时间过长，革兰氏阳性菌依然会被脱去颜色而被误认为阴性菌，这对细菌鉴定判读会造成极其重大的影响。因此，脱色必须把握时间，不同标本的脱色时间也应该灵活掌握，这需要深厚的经验来把握才能染出优秀的片子。一般来说，脱色脱至恰好没有看得见的紫色脱下为最佳停止脱色的时机。
